ЭФФЕКТ ПРИМЕНЕНИЯ ГИТАГАМП «ГИТАГАМП РУТИН – ЖЕЛЕЗО» ПРИ БЛЕОМИЦИН-ИНДУЦИРОВАННОМ ИНТЕРСТИЦИАЛЬНОМ ЗАБОЛЕВАНИИ ЛЕГКОГО У МЫШЕЙ
УДК 615.21/.26
Лунин Владимир Глебович доктор биологических наук, профессор, заведующий лабораторией биологической активности наноструктур, Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи Минздрава РФ seva1oo@yahoo.com Гитлин Илья Исаакович кандидат биологических наук, руководитель проекта, G&G Health seva1oo@yahoo.com
Гитлин Исаак Григорьевич кандидат технических наук, руководитель научно-исследовательских работ, ЗАО «НПК ЭХО» seva1oo@yahoo.com
Владимир Гл . Лунин доктор биологических наук, профессор, заведующий лабораторией биологически активных наноструктур ФГБУ НИИ эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи Минздрава России seva1oo@yahoo.com
Владимир Гл. Лунин доктор биологических наук, профессор, заведующий лабораторией биологически активных наноструктур ФГБУ НИИ эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи Минздрава России seva1oo@yahoo.com Илья Иванович Гитлин И.Г. к.б.н., руководитель проекта, G&G Health seva1oo@yahoo.com Гитлин И.Г. к.т.н., руководитель научно-исследовательской работы АО «НПК «ЭХО» seva1oo@yahoo.com
ЭФФЕКТ ПРИМЕНЕНИЕ НОВОГО ПРЕПАРАТА ГИТАГАМПЫ «ГИТАГАМПЫ РУТИНЫ - ЖЕЛЕЗО» ПРИ БОМИЦИН-ИНДУЦИРОВАННОЕ ИНТЕРСТИЦИАЛЬНОЕ ЗАБОЛЕВАНИЕ ЛЕГКОГО У МЫШЕЙ В СРАВНЕНИИ С ПИРФЕНИДОНОМ
ЭФФЕКТОМ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ НОВОГО СОЕДИНЕНИЕМ «GITAGAMP РУТИН-ЖЕЛЕЗО» В INICE Индуцированный блеомицина полупродукты СРАВНЕНИЕ С ПИРФЕНИДОНОМ
Аннотация . Авторы статьи показали, что исследование эффективности применения нового препарата «Гитагамп рутин — железо» и референс-препаратов пирфенидона, по динамике веса и выживаемости мышей после инстилляции блеомицина показало потенциальную возможность применения препарата «Гитагамп рутин — железо» в качестве протективного средства, переносимого тяжесть протекания. блеомицина. индуцированного интерстициального заболевания легких (ИЗЛ) мышей в поисках с пирфенидоном.
Ключевые слова: блеомицин, интерстициальное заболевание легких мышей, «Гитагамп рутин – железо».
Аннотация. Исследование эффективности нового препарата «Гитагамп рутинирон» и референтного препарата Пирфендони по динамике массы тела и выживаемости после инстилляции блеомшейцина показало потенциальную возможность использования «Гитагамп рутин-железо» в качестве защитного средства. это редкость индуцированного блеомицином интерстициального заболевания легких у мышей по сравнению с пирфенидоном.
Ключевые слова : блеомицин, интерстициальное заболевание легких мышей, «Гитагам рутинирон».
Введение .
Идиопатический легочный фиброз (ИЛФ) имеет низкую заболеваемость (4–16 случаев встречаемости на 100 000 населения), но является смертельным заболеванием неизвестной этиологии. Эта патология широкого интерстициального процесса и высокой смертностью. Фиброзно-ассоциированные воспаления, пролиферация и воспаление фибробластов легких [11; 13]. Пациенты с выраженной склонностью к излечению от фиброза, что приводит к образованию рубцов в тканях и необратимому повреждению легких.
В настоящее время применение трансплантации легких представляет собой лечение, вызывающее тяжелые последствия для здоровья пациентов, однако сопряжено с пересадкой иммуносупрессивных препаратов губительно для организма [16]. Существует несколько редких природных вариантов, в основном принадлежащих к семейной ИЛФ и общим однонуклеотидным полиморфизмом MUC5B, что является факторами, способствующими развитию ИЗЛ [13]. 14].
Один из факторов, который может привести к прогрессированию ИЛФ и другим интерстициальным заболеваниям легких ИЗЛ, является следствием окислительного стресса. Окислительный стресс - это дисбаланс форм кислорода (АФК) и доступной антиоксидантной защиты от них. В нормально-физиологическом состоянии АФК работает иммунная система для опосредования иммунного ответа и захвата патогенов 3, вызывающих воспалительные пути [15]. Отмена регулирования зазора АФК или условия, вызывающие накопление АФК, вызывают серьезные и неправильные потери тканями либо обусловлены, либо через изменение сигнальных путей[12].
Асбестоз и силикоз вызывают воспалительный процесс, стимулируют привлечение иммунных клеток, что, в свою очередь, приводит к повреждению, возбудимому АФК. Некоторые лекарственные образования возникают также остро у легких, например, у пациентов с диффузным альвеолярным поражением. Лежащее в основе воспаление, связанное с легочными сосудами, проницаемостью и гибелью эпителиальных и эндотелиальных клеток. Нарушение окислительного/антиоксидантного баланса важно при патогенезе острых поражений легких и остром дистресс-синдроме [9]. наиболее распространенными являются окружающие-генерирующие соединения в легочной ткани. Цитостатический агент блеомицина, например, комплекс железа, принимает электрон и перемещает его в O2, образуя радикалы O2- [8].
Результаты,[2; 5] встречающихся при встречах положительного исследования нового препарата (НП) на протекание бокового амиотрофического склероза (БАС), оказывают на один из выявленных вариантов действия НП. Влияния НП [1]хорошо иллюстрируется кривыми хемилюминисценции (ХЛ) цельной крови, выявления БАС[1] и снижением риска сверхвысоких концентраций перекиси крови.
Возрастание окислительно-восстановительной активности (Пр/о), приводящее к накоплению сверхвысоких концентраций перекиси сосудов и всех серьезных групп растворимости кислорода в плазме крови с вытекающими последствиями. Снижение энергетического ресурса организма возникает в результате дефицита кислорода в клетках организма и, в последствии, сопровождается снижением ко-ферментов перуватдегидрогеназы[3; 6]. Эффективность иммунной системы и иммунный ответ организма как основной потребитель энергетического ресурса[7] существенно зависит от энергоресурса организма.
Целью настоящего исследования являлась оценка эффективности лечения и заражения ИПЛ.
Модель блеомицин-индуцированного ИЗЛ [9] позволяет выявить препараты, улучшающие легочные функции и естественное здоровье пациента.
Материалы и методы .
Объектом исследования являлся препарат «Гитагамп рутин – железо» (рутин-дигидроаскорбиновая кислота, цитрат железа (III), ЗАО «НПК ЭХО», серия: 04.02.2020, форма выпуска: 10% раствор).
Все исследования проведены на мышах-самцах Black C57/6, массах массы тела 24-26 г, доходах от Питомника «Андреевка» ФГБУ «НЦБМТ» 4 РАМН (№ 4681762791 от 18.03.2020). Маркировка клеток, кодирующих пол животных, породу, предлагающая направление лекарств, название группы. Подбор животных в группе проводился методом случайной выборки, вес животных не должен вызывать сомнений не более чем на 10%.
Все процедуры с обнаружением животных были исследованы и выявлены Институтской комиссией по признанию и удовлетворению животных на предмет наличия права на бесплодие к беспризорным животным[16].
Содержание, питание, содержание и выведение их из эксперимента по наличию в соответствии с требованиями «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР от 12.08.1977 г. N 755).
Для кормления случаев применения экструдированных, полноценных, экологически чистых, сбалансированных лабораторных исследований кормов для животных, применения без консервантов и искусственных красителей на основе отечественного сырья по ГОСТ З 502.58-92 производства ООО «МСТ».
Приготовление раствора «Гитагамп рутин – железо» 8 мг/кг: к 1 мл исходного раствора (концентрация 10%) добавляли 2 мл дистиллированной деионизированной воды. Получение растворенного введения внутрижелудочно в дозе 8 мг\кг массы тела животного.
Приготовление раствора «Гитагамп рутин – железо» 16 мг/кг: к 2 мл исходного раствора (концентрация 10%) добавляли 1 мл дистиллированной деионизированной воды. Полученный раствор вводили внутрижелудочно 1 раз в сутки, в течение 7 дней (первое введение – через 24 часа после инфицирования) в дозе 4 мг\кг массы тела животного.
В качестве препарата сравнения был использован Пирфенидон (5-метил-1-фенилпиридин-2 (1H)-он, MatrixScientific; 53179-13-8, 27.02.2020 г.). Приготовление препарата сравнения: до 40 мг Пирфенидона добавляли 4,0 мл деионизированной воды для получения исходного раствора Пирфенидона в концентрации 10 мг/мл. Пирфенидон вводили животным внутрижелудочно в дозе 100 мг/кг.
Для пациентов с идиопатическим легочным фиброзом (ИЛФ) применяются препараты Блеомицин ((3-{[(2'-{(5S,8S,9S,10R,13S)-15-{6-Амино-2-[(1S)-3 - амино-1-{[(2S)-2,3-диамино-3-оксопропил]амино}-3-оксопропил]-5-метилпиримидин-4-ил}-13-[{[(2R,3S,4S, 5S,6S)-3-{[(2R,3S,4S,5R,6R)-4-(карбамоилокси)-3,5-дигидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси} - 4,5-дигидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2H-пиран-2-ил]окси} (1H-имидазол-5-ил)метил]-9-гидрокси-5-[(1R)-1-гидроксиэтил ] -8,10-диметил-4,7,12,15-тетраоксо-3,6,11,14-тетраазапентадец-1-ил}-2,4'-би-1,3-тиазол-4-ил) карбонил]амино}пропил)(диметил)сульфоний, «Ниппон Кайяку Ко., Лтд.», Япония, 480642, 04.2018 г.). Приготовление раствора Блеомицина (БЛМ): до 50 мг (1,5 ед/мг) БЛМ приливают 31,25 мл раствора 0,9% хлорида натрия для получения раствора 1,6 мг/мл. Раствор БЛМ хранится 5 при -20 ± 4 °С в аликвотах. Одной внутритрахеальной инстилляции 50 мкл (2,0 мг/кг с объемом дозирования 1,25 мл/кг исходного раствора; объем 50 мкл дополняли 0,9% раствором).
Индуцированное БЛМ среди легких у мышей является хорошо документированной моделью интерстициального заболевания легких у мышей. Эта модель используется для исследования выявления противовоспалительных и антифиброзных лекарственных средств для включения легочного фиброза.
Раствор БЛМ вводили животным всеми дозами интратрахеальной инстилляции в 1-ые сутки с использованием катетера BDInsyte 20G в шприцах Norm-JectTuberkulin объемом 1 мл в дозе 50 мкл. Дизайн исследования представлен в Таблице 1.
Таблица 1. Характеристика природных групп животных.
Проводилось ежедневное наблюдение за поведением и общим состоянием здоровья животных. Суточная масса тела учитывалась с 1-х до 26-ти суток. Животных ежедневно осматривают во время развития болезни на предмет изменения в поведении общего состояния здоровья. Эвтаназию и извлечение легких проводили через 120 часов после последнего введения препарата животным на 26-е сутки. Легкие каждую мышь извлекали, взвешивали, промывали раствором 0,9%-ным NaCl и помещали в 10% нейтральный раствор формы (НФИЗЛ).
Стандартный статистический анализ выполнения программного обеспечения Microsoft Excel.
Результаты исследования .
Стандартная модель БЛМ-индуцированного интерстициального заболевания имеет типичные легочные конечные проявления для воспалительной и фиброзной фазы 7 и 14 дней. С целью исследования «Гитагамп рутин – железо» и пирфенидона на БЛМ-индуцированный легочный фиброз, мышам вводили внутрижелудочно «Гитагамп рутин – железо» (8 мг/кг и 16 мг/кг) один раз в сутки с 1 по 21 день после инстилляции БЛМ. Пирфенидон вводили внутрижелудочно внешне с 7 суток после инстилляции БЛМ. Затем определяли массу животных с 1-ых по 26-е сутки (рис.1).
Рисунок 1. Динамика веса мышей по группам.
Примечание: при отклонении веса мышей на 10 % от среднестатистического значения - результат не учитывался.
Анализ динамики веса (рис.2) в течение 26-и дней после инстилляции БЛМ, показал, что между испытуемыми нагрузками. Мыши, получившие БЛМ, начали терять вес на 7-й день, гибель при этом не отмечалась. Тенденция веса была меньше в группах получавших «Гитагамп рутин – железо» (рис. 2А и Б) и Пирфенидон (2Б). По инструкции «Гитагамп рутин – железо» в дозе 8 мг/кг гибель животных не измерялась.
Таким образом, мыши, получавшие «Гитагамп рутин – железо» в дозе 8 мг/кг, принимаемые с 1-го дня, имели значительное увеличение массы тела (рис. 2А).